基金目：中國(guó)石油化工集團(tuán)公司資助項(xiàng)目（J100010）。

　　隨著潤(rùn)滑油的廣泛使用，其生物毒性對(duì)環(huán)境的影響越明顯。礦物潤(rùn)滑油對(duì)地下水的污染影響可達(dá)100年，撤量礦物油會(huì)阻礙植物的生長(zhǎng)和毒害水生生物，約0.1Jig/g的礦物油即可使水生殼類(lèi)生物減壽20%m.因此，有必要研究潤(rùn)滑油的生物毒性。

　　我國(guó)在1995年頒布了《水質(zhì)急性毒性的測(cè)定??發(fā)光細(xì)菌法》，但其適用范圍只限于在水中可溶性化學(xué)物質(zhì)的水質(zhì)急性毒性監(jiān)測(cè)。對(duì)于較難溶于水的試驗(yàn)物質(zhì)，也有學(xué)者采用增溶劑或超聲波技術(shù)等方法增溶；但這些方法可能會(huì)改變?cè)囼?yàn)物質(zhì)的自然性質(zhì)，并導(dǎo)致非代表性的生態(tài)毒性關(guān)系。美國(guó)ASTM于1998年公布了“潤(rùn)滑油毒性測(cè)試：樣品液制備方法的標(biāo)準(zhǔn)”。國(guó)內(nèi)外一些學(xué)者有采用此標(biāo)準(zhǔn)制備樣品液，用珊湖蟲(chóng)、章魚(yú)仔、海蝸牛、水螅等海生生物研究原油和石油產(chǎn)品的生物毒性。這些海洋生物對(duì)石油類(lèi)物質(zhì)的生物毒性耐受性較強(qiáng)，試驗(yàn)時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，成本較篼。

　　本文參照國(guó)內(nèi)、外的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，建立了一套利用發(fā)光細(xì)菌檢測(cè)潤(rùn)滑油急性毒性的試驗(yàn)方法，并成功地檢測(cè)出各種潤(rùn)滑油的急性生物毒性大小。

　　1試驗(yàn)原理、試驗(yàn)設(shè)備和試驗(yàn)方法1.1試原理發(fā)光細(xì)菌急性毒性試驗(yàn)亦稱(chēng)Microtax生物毒性試驗(yàn)，它以明亮發(fā)光桿菌（photobacteriumphosphoreum）作指示生物，以其發(fā)光強(qiáng)度的變化為指示，測(cè)定環(huán)境中有害有毒物質(zhì)的生物毒性。當(dāng)有毒有害物質(zhì)與發(fā)光細(xì)菌接觸時(shí)，發(fā)光強(qiáng)度立即改變，并隨著毒物濃度的增加而發(fā)光減弱。這種發(fā)光強(qiáng)度的變化，可用精密測(cè)光儀器定量測(cè)定。

　　1.2試驗(yàn)菌種和試驗(yàn)儀器選用明亮發(fā)光桿菌T3小種作為菌種。發(fā)光細(xì)菌的制備有2種方法：一種是發(fā)光細(xì)菌新鮮菌懸液的制備，另一種是發(fā)光細(xì)菌凍干粉復(fù)蘇法其中凍干粉復(fù)蘇法是國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，其優(yōu)點(diǎn)是可實(shí)行質(zhì)量控制，凍干粉可長(zhǎng)期保存方便使用，操作簡(jiǎn)便，節(jié)約時(shí)間本文試驗(yàn)采用凍干粉復(fù)蘇法，菌種由中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所提供。

　　測(cè)光儀器選用國(guó)產(chǎn)DXY-2型生物毒性測(cè)試儀（中國(guó)科學(xué)院南京土壤研究所儀器廠生產(chǎn)），其工作原理如所示1.3試方法由于潤(rùn)滑油在自然條件下很難溶于水，因此本文采用半數(shù)效應(yīng)載荷（medianeffectload，ELW）作為潤(rùn)滑油在水中生物毒性的判定指標(biāo)，并采用載荷率（loadingrate，加人的試驗(yàn)材料與含水介質(zhì)之比）來(lái)衡童潤(rùn)滑油與水的量化關(guān)系。

　　為了模擬自然條件下潤(rùn)滑油的典型污染情況，本文參照美國(guó)ASTM6081-98標(biāo)準(zhǔn)中的樣品制備方法準(zhǔn)備樣品液，使用水融合組分（wateraccommodatedfraction，WAF）方法制備試驗(yàn)樣品液。

　　WAF溶液的制備如和所示。攪拌櫸應(yīng)該以適當(dāng)?shù)乃俣冗\(yùn)轉(zhuǎn)，以保證液面旋渦的深度為WAF溶液制備容器中試驗(yàn)溶液高度的10% ~35%.攪拌時(shí)應(yīng)注意旋轉(zhuǎn)速度，不要把試驗(yàn)材料向下拉到容器的底部，并且攪拌速度不要過(guò)快，以免產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。

　　在制備WAF溶液時(shí)，為了使?jié)櫥秃退芤撼浞秩诤希枰欢ǖ臄嚢钑r(shí)間隨著攪拌時(shí)間的延長(zhǎng)，水中油的含童增加，但增加量逐漸平緩根據(jù)Gir-ling的建議，一般需要攪拌20~24h.攪拌后，應(yīng)沉淀1~2h因?yàn)楸疚倪x用的試驗(yàn)生物是海生發(fā)光細(xì)菌，這種發(fā)光細(xì)菌需要在含鹽水溶液中生存，因此，將加有3%NaCl的蒸餾水作為準(zhǔn)備WAF中的水溶液和稀釋水溶液。

　　采用發(fā)光細(xì)菌凍干粉復(fù)蘇法制備試驗(yàn)用發(fā)光細(xì)菌液，并測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)毒物化汞（HgCl）的￡（值是否在0.1±0.02mg/L的范圍內(nèi)，以檢測(cè)制備的發(fā)光細(xì)菌液是否合格。

作者：佚名　　來(lái)源：中國(guó)潤(rùn)滑油網(wǎng)